# 시험동물 조직 전처리 및 포매 지침

> **출처**: 한국산업안전보건공단 (KOSHA)
> **지침번호**: T-25-2021
> **원본 URL**: https://portal.kosha.or.kr/openapi/v1/file/down/FL00016412097/4
> **License**: 공공누리 출처표시 (변경금지)
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<tr><th colspan="5"></th></tr>
<tr><td colspan="2"></td><td>KOSHA GUIDE</td><td colspan="2"></td></tr>
<tr><td colspan="2"></td><td>T - 25 - 2021</td><td colspan="2"></td></tr>
<tr><td colspan="2"></td><td></td><td colspan="2"></td></tr>
<tr><td></td><td colspan="3">시험동물 조직의 전처리 및 포매 지침</td><td></td></tr>
<tr><td colspan="5">2021. 12.<br>한국산업안전보건공단</td></tr>
</table>

안전보건기술지침의 개요
○ 작성자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 이 용 훈
○ 개정자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 박 희 선
○ 제·개정 경과
- 2017년 9월 산업독성분야 기준제정위원회 심의(제정)
- 2021년 11월 산업독성분야 기준제정위원회 심의(개정)
○ 관련규격 및 자료
- RITA and NACAD groups :　Revised Guides for Organ Sampling and Trimming in Rats and Mice - Part 1, 2, 3
- OECD, Guidance document on histopathology for inhalation toxicity studies, supporting TG 412 and TG 413. 2010
○ 관련법규, 규칙, 고시 등
- 산업안전보건법 제105조(유해인자의 유해성ㆍ위험성 평가 및 관리), 제108조(신규화학물질의 유해성‧위험성 조사)
- 산업안전보건법 시행규칙 제141조(유해인자의 분류기준), 제143조(유해인자의 관리 등)
- 고용노동부 예규 제166호(화학물질의 유해성·위험성 평가에 관한 규정)
- 국립환경과학원 고시 제2020-46호(화학물질의 시험방법에 관한 규정)
○ 기술지침의 적용 및 문의
- 이 기술지침에 대한 의견 또는 문의는 한국산업안전보건공단 홈페이지(www.kosha.or.kr)의 안전보건기술지침 소관 분야별 문의처 안내를 참고하시기 바랍니다.
- 동 지침 내에서 인용된 관련규격 및 자료, 법규 등에 관하여 최근 개정본이 있을 경우에는 해당 개정본의 내용을 참고하시기 바랍니다.
공표일자 : 2021년 12월
제 정 자 : 한국산업안전보건공단 이사장

KOSHA GUIDE
T - 25 - 2021


# 시험동물 조직의 전처리 및 포매 지침


## 1. 목적


### 이 지침은 산업안전보건법 제105조(유해인자의 유해성·위험성평가 및 관리), 제108조(신규화학물질의 유해성ㆍ위험성 조사), 산업안전보건법 시행규칙 제141조(유해인자의 분류기준), 제143조(유해인자의 관리)에 따라, 화학물질 건강유해성시험법의 조직병리검사 절차 중 조직 전처리 및 포매 방법을 정함을 목적으로 한다.


## 2. 적용범위


### 이 지침은 법과 관련하여 화학물질 건강유해성시험법의 조직병리검사 항목 중 조직 전처리 및 포매 방법에 적용한다.


## 3. 용어의 정의


### (1) 이 지침에서 사용되는 용어의 정의는 다음과 같다.


### (가) “수세(Washing)”란 조직 내 고정액을 제거하기 위해 흐르는 물에 일정시간 담가두는 것을 말한다.


### (나) “탈수(Dehydration)”란 조직 내 수분을 조직 밖으로 배출하는 과정을 말한다.


### (다) “크실렌 대체제(Xylene subsitute)”란 크실렌을 대체하여 사용할 수 있는 제품으로서, 이용 시 병리조직학적 검사용 시판되는 제품(예: Histoclear Ⅱ, S3 Histo 등) 중 조직처리기에서 사용 가능한 제품으로 선택한다.


### (라) “청명(Clearing)”이란 조직전처리 과정에서 에탄올을 크실렌(크실렌 대체제)으로 치환하는 과정이다.


### (마) “침투(Infiltration)”란 포매제(파라핀)을 조직내로 스며들게하는 과정이다.


### (바) “포매(Embedding)”란 포매제(파라핀)을 조직에 침투 시켜 조직전체를 경화시키는 과정이다.


### (사) “조직처리기(Tissue processor)란 시간별로 시약을 교체시켜 조직의 탈수, 청명, 침투를 자동으로 처리하는 기계를 말한다.


### (아) “조직포매기(Tissue embedding center)란 포매틀을 이용하여 조직을 일정한 형태의 파라핀 블록으로 만들기 위한 기기를 말한다.


### (자) “카세트(Cassette)”란 조직처리과정에서 용매가 용이하게 드나들 수 있도록 작은 타공이 되어있는 플라스틱 제품으로, 내열 및 내화학성을 지닌다.


### (2) 그 밖의 용어의 뜻은 이 지침에서 특별한 규정이 있는 경우를 제외하고는 산업안전보건법, 같은 법 시행령, 같은 법 시행규칙에서 정하는 바에 의한다.


## 4. 시험의 방법


### 4.1 작업절차

| 고정액의 제거 | (삭정한 조직의 수세) |
| --- | --- |
| 탈수, 청명, 파라핀침투 | (조직처리기) |
| 포 매 | (조직포매기) |


### 4.2. 실시방법


### 4.2.1 주의사항


### (1) 에탄올 및 크실렌(크실렌 대체제)은 인화성 물질이므로 화기에 근접하지 않도록 주의한다.


### (2) 에탄올 및 크실렌(크실렌 대체제) 교체 시 작업자는 마스크, 장갑을 착용하고, 배기장치를 가동시킨 후 작업한다.


### (3) 용해된 파라핀은 비교적 고온(약 60℃)이어서 화상을 입을 우려가 있으므로 주의하여 취급한다.


### 4.2.2 고정액의 제거(삭정한 조직의 수세)


### (1) 삭정한 조직편을 넣은 카세트를 수돗물로 6시간 수세한다.


### (2) 사용 후의 고정액(10% 중성 포르말린)은 지정된 폐액통에 회수한 후 적합한 방법으로 폐기하도록 한다.


### 4.2.3 조직처리기 시약 교체방법


### 4.2.3.1 시약교체 주기


### 각 조직처리기 사용량을 확인하여, 적절한 시기에 새로운 시약으로 교체함으로써 조직의 상태를 양호하게 처리하도록 한다. 시약교체주기는 <표 1> 및 사용하는 조직처리기의 사용설명서를 참고한다.


### <표 1> 시약교체주기

<table>
<tr><th>단계</th><th>시약조</th><th>시약명</th><th>교체주기(카세트 수)</th></tr>
<tr><td rowspan="2">탈수</td><td>1</td><td>에탄올</td><td>600±100</td></tr>
<tr><td>2~7</td><td>에탄올</td><td>1000±100</td></tr>
<tr><td>청명</td><td>8~10</td><td>크실렌(크실렌 대체제)</td><td>1000±100</td></tr>
<tr><td>침투</td><td>파라핀</td><td>파라핀</td><td>1200±100</td></tr>
<tr><td>세척</td><td>11</td><td>크실렌(크실렌 대체제)</td><td>8번 사용</td></tr>
<tr><td>세척</td><td>12</td><td>에탄올</td><td>8번 사용</td></tr>
<tr><td>세척</td><td>13</td><td>증류수</td><td>8번 사용</td></tr>
</table>


### 4.2.3.2 시약교체


### (1) 조직처리기의 각 시약조에 해당되는 시약을 새로운 시약으로 채운다.


### (2) 사용 완료한 시약(에탄올, 크실렌 등)은 지정된 폐액통에 회수한 후 적합한 방법으로 폐기하도록 한다.


### 4.2.4 탈수, 청명, 침투 방법(조직처리기 사용)


### 4.2.4.1 조직처리기 작동 절차


### (1) 저장조의 뚜껑을 열어 조직처리 할 카세트가 든 랙을 넣는다.


### (2) 전원을 작동한다.


### (3) 동물종 별로 조직 전처리 조건이 다르므로 아래 해당 설치류에 해당하는 시약처리 단계를 설정하고 조직처리기를 작동한다. 각 동물 별로 시약처리 조건은 <표 2> 및 사용하는 조직처리기의 사용설명서를 참고한다.


### <표 2> 조직처리기 작동 절차

<table>
<tr><th rowspan="2">단계</th><th rowspan="2">시약</th><th colspan="2">단계별 시간(단위: 분)</th><th rowspan="2">저장조 온도<br>(℃)</th><th rowspan="2">저장조<br>조건*</th></tr>
<tr><td>랫드</td><td>마우스</td></tr>
<tr><td>1 단계<br>2 단계<br>3 단계<br>4 단계<br>5 단계<br>6 단계<br>7 단계<br>8 단계<br>9 단계<br>10 단계<br>11 단계<br>12 단계<br>13 단계</td><td>에탄올 70%<br>에탄올 95%<br>에탄올 95%<br>에탄올 99.9%<br>에탄올 99.9%<br>에탄올 99.9%<br>에탄올 99.9%<br>크실렌(크실렌 대체제)<br>크실렌(크실렌 대체제)<br>크실렌(크실렌 대체제)<br>파라핀<br>파라핀<br>파라핀</td><td>60<br>45<br>45<br>40<br>40<br>40<br>60<br>45<br>45<br>60<br>45<br>60<br>60</td><td>60<br>40<br>40<br>30<br>30<br>30<br>45<br>40<br>40<br>45<br>40<br>40<br>60</td><td>20±5<br>20±5<br>20±5<br>20±5<br>20±5<br>20±5<br>20±5<br>20±5<br>20±5<br>20±5<br>62<br>62<br>62</td><td>-<br>진공<br>진공<br>진공<br>진공<br>진공<br>진공<br>진공<br>진공<br>진공<br>가압/진공<br>가압/진공<br>가압/진공</td></tr>
<tr><td colspan="6">* 저장조의 진공 및 가압 조건은 조직처리기 제조장비사의 권고를 참고한다.</td></tr>
</table>


### (4) 완료 후 조직처리기 저장조의 뚜껑을 열어 카세트 랙을 꺼낸 후 뚜껑을 닫고 세척프로그램을 이용하여 저장조의 파라핀 여분을 제거한다.


### (5) 세척이 완료되고 저장조 내 여분의 수분을 핸드타올로 닦아낸다.


### 4.2.5 포매방법(조직포매기 사용)


### 4.2.5.1 포매준비


### (1) 조직처리기의 파라핀 침투 과정이 종료되기 30분 이전에 조직포매기를 가동하여 파라핀이 미리 용해될 수 있도록 준비한다.


### (2) 조직처리 과정이 종료되면 랙을 꺼내 포매기의 카세트 워머로 옮긴 후 가능한 빠른 시간내에 포매작업을 행한다.


### 4.2.5.2 포매 순서


### (1) 카세트 워머에서 핀셋으로 카세트를 꺼내어 조직포매기의 작업대 가열부에 놓는다.


### (2) 카세트의 덮개를 연다.


### (3) 작업대 가열부의 온도가 올라가면 파라핀 용출기의 스위치를 눌러서 포매틀에 소량의 파라핀을 넣는다.


### (4) 핀셋홀더에서 따뜻하게 한 핀셋을 사용해서 카세트의 조직편을 조직 포매틀로 옮긴다. 소형 망사봉투를 사용한 경우는 봉투 내의 조직을 빠짐없이 꺼내도록 주의한다.


### (5) 포매틀을 작업대 냉각부위에 놓고 따뜻해진 핀셋을 사용하여 장기의 포매위치를 정한다. 박절하고자 하는 절단면이 아래를 향하도록 조직을 위치시킨 후 파라핀이 굳기 전에 조직편을 고정한다.


### (6) 카세트를 포매틀 위에 올려놓고, 파라핀 용출기의 스위치를 눌러 카세트에 가득 차도록 파라핀을 주입한다.


### (7) 포매틀을 냉각판에 놓아 파라핀이 냉각되며 굳도록 한다.


### (8) 카세트와 포매틀을 분리한다.


### (9) 카세트 주변에 붙어있는 불필요한 파라핀을 제거한다.


## 5. 이상발생 시의 처리


### (1) 에탄올 및 크실렌(크실렌 대체제) 등이 눈에 들어가면 바로 다량의 물 또는 생리식염수로 충분히 세정한다.


### (2) 용해된 파라핀을 엎지르거나, 포매기의 작업대 등에 의해 화상을 입으면 즉시 수돗물로 냉각한다.

KOSHA GUIDE
T - 25 - 2021


### (3) 필요시 의사의 진단을 받는다.


### (4) 조직처리기, 조직포매기 및 파라핀 용해기의 온도가 정상 이상으로 상승하면 점검을 하고 고장이라고 판단되면 전문회사에 수리를 의뢰한다.

지침 개정 이력
□ 개정일 : 2021. 12.
○ 개 정 자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 박희선
○ 개정사유 : 산업안전보건법령 및 관련 고시 폐지 등 개정
○ 주요 개정내용
- 산업안전보건법 전면개정에 따른 변경내용 반영
- 고용노동부 고시(화학물질의 유해성․위험성 시험 등에 관한 기준, 고용노동부고시 제2020-57호) 폐지에 따른 국립환경과학원 고시(화학물질의 시험방법에 관한 규정) 인용```
