# 생체시료 중 석면소체 및 석면섬유 분석지침

> **출처**: 한국산업안전보건공단 (KOSHA)
> **지침번호**: T-9-2016
> **원본 URL**: https://portal.kosha.or.kr/openapi/v1/file/down/FL00015884288/3
> **License**: 공공누리 출처표시 (변경금지)
> **추출 방식**: PDF → kordoc (라텔웍스 자체 도구, HTML 표 보존)
> **주의**: 이미지·일부 시각적 서식 손실 가능. 정확 원본은 위 URL.

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<tr><td colspan="3">2016.10<br>한국산업안전보건공단</td></tr>
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안전보건기술지침의 개요
○ 작성자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 한정희
○ 개정자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 권부현
○ 제·개정 경과
- 2013년 11월 산업독성분야 제정위원회 심의
- 2016년 10월 산업독성분야 제정위원회 심의(개정)
○ 관련규격 및 자료
- 일본 노동자건강복지기구-환경재생보건기구. 석면소체계측매뉴얼 제2판, 2011
- NIOSH Manual of Analytical Methods 7400 『Asbestos and other fibers by PCM』
○ 관련법규, 규칙, 고시 등
- 산업안전보건법 제43조(건강진단)
- 산업재해보상보험법 시행령 제34조(업무상 질병의 인정기준)
- 산업안전보건법 시행규칙 제100조(검사항목 및 실시방법)
○ 기술지침의 적용 및 문의
- 이 기술지침에 대한 의견 또는 문의는 한국산업안전보건공단 홈페이지(www.kosha.or.kr)
의 안전보건기술지침 소관분야별 문의처 안내를 참고하시기 바랍니다.
- 동 지침 내에서 인용된 관련규격 및 자료, 법규 등에 관하여 최근 개정본이 있을
경우에는 해당 개정본의 내용을 참고하시기 바랍니다.
공표일자 : 2016년 10월 31일 제정자 : 한국산업안전보건공단 이사장

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## 생체시료 중 석면소체 및 석면섬유 분석지침

1. 목 적
이 지침은 「산업안전보건법 시행규칙」제100조(검사항목 및 실시방법)에 따라, 생체

시료 중 석면함유 여부 및 농도를 측정하기 위한 시료채취 및 분석방법 제시를 목적

으로 한다.

2. 적용범위
이 지침은 산업안전보건법 제43조 (건강진단) 및 산업재해보상보험법 시행령 제34조

(업무상 질병의 인정기준)에서 정한 석면으로 인한 업무상 질병의 판정에 적용한다.

3. 용어의 정의
(1) “섬유(fiber)”란 길이와 직경의 비가 3 : 1 이상인 입자상 물질을 말한다.

(2) “석면(asbestos)”이란 길고, 얇고, 유연하며 강한 섬유로 쉽게 분리되는 석면형

(asbestiform)으로 결정화한 사문석계 또는 각섬석계 규산염 광물로서 종류(CAS

No.)는 백석면(chrysotile, 12001-29-5), 갈석면(amosite, 12001-28-4), 청석면

(crocidolite, 12172-73-5), 트레모라이트석면(tremolite, 77536-68-6), 악티노라이

트석면(actinolite, 77536-66-4), 안소필라이트석면(anthophyllite, 77536-67-5)이다.

(3) “석면섬유(asbestos fiber)”란 길이와 직경의 비가 3:1 이상이며 길이가 5 ㎛이상

인 섬유 모양을 가지고 있는 석면을 말한다.

(4) “석면소체(asbestos body)”란 폐내에 흡입된 석면섬유가 생체내 대식세포에 의해

탐식되어 오랜 기간 동안 단백성 물질을 흡착하여 형성된 것을 말한다.

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4. 시약 및 기구
4.1 기구

(1) 위상차현미경(phase contrast microscope; PCM) : 대안렌즈(10×), 대물렌즈(40

∼ 45×), 구경수차(numerical aperture; 0.65～0.75)를 사용한다.

(2) 현미경 계수자 : 직경 100 ㎛의 원형시야(시야면적 0.00785 ㎟)를 가진 Walton

-Beckett graticule(type G-22)을 사용한다.

(3) 스테이지마이크로미터(stage micrometer) : 눈금간격 0.01 ㎜

(4) 아세톤 증기화 장치(condensation washer) : 아세톤을 가열하여 아세톤 증기

를 발생시키는 장치로 상용화된 장치를 사용할 수 있다.

(5) 전자저울 (balance) : 0.01 ㎎～100 g 측정가능

(6) 흡인여과기(aspirator) : 25 ㎜ 필터용

(7) 원심분리기(centrifuge) : 50 ㎖ 원심분리관을 사용가능하며 3,000 rpm 이상의

회전수로 작동 가능한 것

(8) 건조기(dry oven) : 40～60℃의 온도설정 가능한 것

(9) 초음파분산기(ultrasonicator)

(10) 시험관교반기(vortex mixer)

(11) 원심분리관 : 폴리에틸렌 또는 유리재질로 마개가 있는 것

(12) 유리병(vial) : 유리재질로 마개가 있는 것

(13) 비이커(conical beaker) : 50～100 ㎖

(14) 마이크로피펫(micropipet) : 5～500 ㎕

(15) 페트리디쉬(petri dish) : 직경 100 ㎜

(16) 필터(filter) : 직경 25 ㎜, 공극 0.8 ㎛ 또는 0.45 ㎛의 셀룰로오스에스테르멤

브레인(mixed cellulose ester membrane; MCE) 필터를 사용한다.

(17) 칼(scalpel) : 외과용 메스, # 10

(18) 주사기(syringe)

(19) 슬라이드글라스(slide glass) : 표준형×75 ㎜

(20) 커버글라스(cover glass) : 22×22 ㎜

(21) 계수기(counter)

(22) 기타 메스실린더(mess cylinder), 주사기(syringe), 여과지(filter paper), 알루

미늄 호일(aluminum foil)

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4.2 시약

(1) 조직소화액 : 20% 차아염소산나트륨(sodium hypochlorite) 또는 5% 수산화칼

륨(KOH)을 사용한다. 또한 이를 함유한 세제 등도 사용할 수 있다.

(2) 아세톤(acetone) : 특급 또는 1급 시약

(3) 트리아세틴(triacetin) : 굴절율 1.434. 기타 굴절율이 1.5 이하의 봉입제로 트리

아세틴 봉입표본과 비교하여 섬유의 시인성에 차이가 없으면 사용가능하다.

(4) 크실렌(xylene) : 특급 또는 1급 시약

(5) 에탄올(ethanol) : 특급 또는 1급 시약

5. 시료의 준비
5.1 시료의 종류

(1) 폐실질 조직

석면노출수준을 평가하기 위하여 석면소체를 계수할 경우 종양부를 제외한 일

정량 이상의 폐실질 조직을 사용한다. 폐실질 조직 이외의 종양부, 림프절, 흉

막(흉막반 포함)의 조직에 함유된 석면소체에 대해서는 폐실질조직과 같은 평

가방법이 확립되어 있지 않기 때문에 노출평가에 부적합하다.

(2) 시료의 보존형태

(가) 포르말린 고정조직 : 폐조직을 중성완충포르말린에 고정한다.

(나) 파라핀 포매조직 : 폐조직을 파라핀에 고정한 것으로 0.2～0.3 ㎝ 이상(건

조중량 0.05 g 이상)의 조직이 필요하다.

5.2 시료의 채취

(1) 부검 폐

폐의 좌우 각 엽에서 폐벽측에 가까운 부분의 실질조직을 약 5 부위 정도 채

취하는 것이 좋다. 0.5～1 g 정도로 같은 양을 1 개의 시료로 취급한다. 1 부

위를 채취할 경우 하부의 말단조직에서 2～5 g 정도 채취한다.

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(2) 수술절제 폐

하부의 말단조직에서 2～5 g 정도 채취한다.

(3) 파라핀 포매 폐

포매한 조직절편을 수 ㎜로 잘라 크실렌에 24시간 이상 두어 탈파라핀을 한

후 에탄올로 세정한다.

6. 시료의 제작 및 분석방법
(1) 시료의 세절

채취한 조직은 기관지와 혈관부분을 피하여, 정상 폐실질조직을 메스를 이용하

여 수 ㎜ 크기로 잘게 자른다.

(2) 시료의 중량 측정

시료를 건조기로 110℃에서 2～4시간 건조한 후 중량을 측정한다.

6.1 시료의 제작

(1) 건조한 시료를 50 ㎖ 원심분리관에 넣어, 조직소화액 30 ㎖를 가한다. 시료의

양이 2 g이 넘으면 소화액의 양을 습중량 1 g에 15 ㎖을 기준으로 늘인다.

(2) 마개를 덮은 원심분리관을 60℃ 건조기에서 수 시간 정도 두어 조직덩어리가

완전히 없어질 때까지 소화한다.

(3) 소화한 시료를 3,000 rpm에서 30분간 원심분리한 후 피펫을 사용하여 상층액

을 제거한다. 남은 침전물이 많을 경우 1～2 회 소화처리를 반복한다.

(4) 원심분리관에 증류수 30 ㎖을 넣고 초음파분산기를 사용하여 1분 정도 분산하

고 교반기로 교반하여 침전물을 골고루 분산한다. 다시 원심분리하여 상층액

을 제거한 후 이러한 세정작업을 3회 반복한다.

(5) 세정작업 후, 50 ㎖ 유리병에 원심분리관의 내용물을 모두 옮기고, 증류수를

넣어 50 ㎖가 되게 한다.

(6) 유리병안에 현탁액을 교반하여 균질하게 분산한 후, 피펫으로 1～20 ㎖으로

적당량을 나누어, 50 ㎖ 비이커로 옮긴다.

(7) 비이커에 증류수 20～40 ㎖를 넣고 희석하여, 전량을 흡인여과기에 장착된 필

터를 통하여 여과한다.

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(8) 여과한 필터를 페트리디쉬로 옮겨 오염이 되지 않도록 실온에서 건조하거나

40℃ 전후의 건조기에서 2시간 이상 건조한 후 메스로 반으로 자른다.

(9) 깨끗한 슬라이드글라스 위에 시료포집면을 아래로 향하게 하여 필터를 덮고

아세톤 증기발생장치로 고정 및 투명화한다.

(10) 트리아세틴을 2～3 방울 떨어뜨리고, 커버글라스를 덮어 현미경 관찰표본을

만든다.

6.2 분석방법

6.2.1 석면의 계수

(1) 위상차현미경(접안렌즈 10배, 대물렌즈 40배)을 이용하여 관찰표본 중의 석면

소체를 계수한다(별첨. 석면소체의 형태 예시 참조). 필터의 전체면을 관찰하

여 석면소체의 수를 기록한다.

(2) 시야를 상하좌우로 분석자가 관찰하고자 하는 방향으로 연속적으로 이동하여

계수한다. 접안렌즈에 장착된 현미경계수자의 큰원을 기준으로 안쪽의 석면소

체를 계수한다.

(3) 그림과 같이 전면계수의 경우(실선) 시야상을 1/2 정도 겹치도록 하여 이웃한

시야로 이동한다. 시야수를 계수할 경우(점선) 시야상이 접하도록 하여 이웃한

시야로 이동하며 계수한다.

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6.2.2 석면농도의 계산

(1) 다음 식에 의하여 시료분취율을 계산한다.

 

×

#

 

․F:분취율

․ Va : 전체 용액 중 분취량(㎖)

․ V : 전체 용액량(㎖)

․ Ac : 계수면적(㎟)

․ Ae : 유효필터면적(㎟)

(2) 다음 식에 의하여 석면소체의 농도를 계산한다.



 

 

 ×

․ CAB : 석면소체의 농도(개/g 건조폐)

․ NAB : 시료에수 계수한 석면소체의 숫자(개)

․F:분취율

․ WL : 시료의 건조중량(g)

(3) 필터 전면을 계수하여 농도계산을 할 경우에는 필터 위에 포집된 시료면의 면

적(유효필터면적)이 필요하다. 사용한 흡인여과기의 직경과 필터위에 포집된

시료면의 직경을 측정한 후 면적을 계산한다. 25 ㎜ 여과지인 경우 385 ㎟이

다.

(4) 검출하한값을 계산한다. 검출하한값은 계수한 결과 1개의 석면소체가 검출되

었을 경우의 농도로 계산한다.

(5) 필요에 따라 석면소체 계수와 동시에 석면섬유를 계수하는 것이 좋다. 섬유농

도의 계산법은 석면소체의 경우와 같다.

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<별첨> 석면소체의 형태(예시)

| 1. 섬유의 양쪽 끝이 둥근 분절로<br>쌓여 있는 아령모양의 석면소체 | 2. 섬유의 양쪽 끝이 둥근 분절로<br>쌓여 있는 형태의 석면소체 |
| --- | --- |
| 3. 둥근 분절이 늘어서 있는 염주<br>또는 경단 모양의 석면소체 | 4. 섬유가 깊게 덮여있는 형태의 석면소체 |
| 5. 다수의 분절로 섬유가 길게 덮여<br>있는 형태의 석면소체 | 6. 섬유가 홀쭉하게 덮여있는 형태<br>의 석면소체 |

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| 7. 다수의 분절로 섬유가 홀쭉하게<br>덮여있는 형태의 석면소체 | 8. 하나의 섬유에 몇 개의 분절을<br>수반하는 석면소체 |
| --- | --- |
| 9. 복수의 섬유가 있는 석면소체 | 10. 섬유가 굴곡되어 있는 석면소체 |
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