# 일산화탄소의 생물학적 노출지표물질 분석에 관한 기술지침

> **출처**: 한국산업안전보건공단 (KOSHA)
> **지침번호**: H-99-2023
> **원본 URL**: https://portal.kosha.or.kr/openapi/v1/file/down/FL00020455125/2
> **License**: 공공누리 출처표시 (변경금지)
> **추출 방식**: PDF → kordoc (라텔웍스 자체 도구, HTML 표 보존)
> **주의**: 이미지·일부 시각적 서식 손실 가능. 정확 원본은 위 URL.

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<tr><td rowspan="2"></td><td colspan="2">일산화탄소의 생물학적 노출지표물질<br>분석에 관한 기술지침</td><td rowspan="2"></td></tr>
<tr><td colspan="3">2023.8.<br>한국산업안전보건공단</td></tr>
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안전보건기술지침은 산업안전보건기준에 관한 규칙 등 산업안전보건법령의 요구사항을 이행하는데 참고하거나 사업장 안전·보건 수준향상에 필요한 기술적 권고 지침임

KOSHA Guide H-99-2023

안전보건기술지침의 개요
○ 작성자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 김현영
○ 개정자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 이미영(1차 개정)
한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 이미영(2차 개정)
○ 제․개정 경과
- 2012년 10월 산업의학분야 제정위원회 심의(제정)
- 2021년 8월 산업의학분야 표준제정위원회 심의(법령 및 규격 최신화)
- 2022년 12월 산업의학분야 표준제정위원회 심의(개정)
- 2023년 7월 산업의학분야 표준제정위원회 심의(개정)
○ 관련규격 및 자료
- 박성우, 최영남, 이광영, 김남이, 김동환., 국립과학수사연구소 화학분석과 혈중 일산 화탄소
헤모글로빈의 분석법에 관하여. Analytical science & technology 1992;5(1)
- 한국산업안전공단 산업안전보건연구원. 건강진단 기준상 유해물질 분석법의 표준화 에
대한 연구 (II). 1998
- 한국산업안전공단 산업안전보건연구원. 유해물질 노출 근로자의 생물학적 모니터링을
위한 지표물질 분석법의 표준화 연구 (II). 1999
- 김정원 등, 특수건강진단 검사항목 현행화 및 실무지침의 개정 연구, 산업안전보건
연구원, 2017-연구원-913, 2017
- ACGIH. Carbon monoxide. In Documentation of the Threshold Limit Values and
Biological Exposure Indices. 2001
- Beutler E, West C. Simplified determination of carboxyhemoglobin. Clin Chem 1984;30(6):871-4
- Madany IM. Carboxyhemoglobin levels in blood donors in Bahrain. Sci Total
Environ 1992;116:53-5
○ 관련법규․규칙․고시 등
- 산업안전보건법 시행규칙 [별표 24] 특수건강진단ㆍ배치전건강진단ㆍ수시건강진
단의 검사항목(제206조 관련)
- 고용노동부고시 제2020조-61호(특수건강진단기관의 정도관리에 관한 고시)
- 고용노동부고시 제2020조-60호(근로자 건강진단 실시기준)
- 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원.「근로자건강진단 실무지침」제1권 특수 건강진
단 개요. 2022-산업안전보건연구원-777
○ 안전보건기술지침의 적용 및 문의
- 이 기술지침에 대한 의견 또는 문의는 한국산업안전보건공단 홈페이지(www.kosha.or.kr)의
안전보건기술지침 소관 분야별 문의처 안내를 참고하시기 바랍니다.
- 동 지침 내에서 인용된 관련규격 및 자료, 법규 등에 관하여 최근 개정본이 있을
경우에는 해당 개정본의 내용을 참고하시기 바랍니다.
공표일자 : 2023년 8월 24일 제정자 : 한국산업안전보건공단 이사장

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목차1. 목적 ·········································································································1 2. 적용범위 ··································································································1 3. 용어의정의 ······························································································1 4. 분석장비 ·································································································2 5. 분석방법 ································································································2 5.1 혈액 중 카복시헤모글로빈 (COHb) 분석 ············································2

KOSHA Guide H-99-2023

## 일산화탄소의 생물학적 노출지표물질

## 분석에 관한 기술지침

1. 목적
이 지침은 산업안전보건법(이하 “법”이라고 한다) 제130조 및 같은 법 시행규

칙(이하 “시행규칙”이라고 한다) 제206조(특수건강진단 등의 검사항목 및 실시

방법 등) 별표 24, 고용노동부고시 제2020조-61호(특수건강진단기관의 정도관리

에 관한 고시) 및 고용노동부고시 제2020조-60호(근로자 건강진단 실시기준)에

따라 일산화탄소에 노출된 근로자의 생물학적 노출평가와 관련된 노출지표물질

의 분석방법을 제시함을 목적으로 한다.

2. 적용범위
이 지침은 법, 시행규칙 및 고용노동부고시에 따라 실시하는 근로자 건강진단

중 일산화탄소에 노출되는 근로자의 생물학적 노출 평가에 적용한다.

3. 용어의 정의
(1) 이 지침에서 사용하는 용어의 뜻은 다음과 같다.

(가) “생물학적 노출평가”란 혈액, 소변 등 생체시료로부터 유해물질 자체 또

는 유해물질의 대사산물, 또는 생화학적 변화산물 등을 분석하여 유해물

질 노출에 의한 체내 흡수정도 또는 건강영향 가능성 등을 평가하는 것

을 말한다.

(나) “생물학적 노출지표물질”이란 생물학적 노출평가를 실시함에 있어 생체

흡수정도를 반영하는 물질로서 유해물질 자체나 그 대사산물, 생화학적

변화산물 등을 말한다.

(다) “검출한계”란 공시료 신호 값과 통계적으로 유의하게 다른 신호 값을 나타

낼 수 있는 최소의 농도를 말한다. 이 경우 가장 널리 쓰이는 대로 공시

료 신호 값의 차이가 공시료 신호 값 표준편차의 3배인 경우로 한다.

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제외하고는 산업안전보건법, 같은 법 시행령, 같은 법 시행규칙 및 산업안전

보건기준에 관한 규칙에서 정하는 바에 따른다.

4. 분석장비
분석 장비는 자외가시부 분광광도계 (ultraviolet/visible spectrophotometer;

UV/VIS Spectrophotometer)를 이용한다.

5. 분석방법
5.1 혈액 중 카복시헤모글로빈 (COHb) 분석

(1) 시료 채취 및 주의 사항

(가) 시료 채취 시기

시료 채취는 작업 종료 후 15분 이내에 채취 한다.

(나) 시료채취 요령

① 작업 종료 후 15분 이내에 채혈하고, 혈액시료는 EDTA 또는 헤파린 처리

된 용기에 플루오르화나트륨을 넣은 후 실험 전까지 밀봉하여

4℃ 암소에

보관한다. 이는 헤모글로빈 변성이나 세균 증식에 의한 일산화탄소 생성

을 억제하기 위함이다.

② 흡연여부나 직업적 혹은 비직업적 염화메틸렌 노출여부를 모니터링 하여

야 하며, 흡연자의 경우는 평가대상에서 제외한다.

③ 헤모글로빈의 스펙트럼은 pH의 영향이 크므로 pH 6.5를 유지한다.

(다) 주의 사항

① COHb 농도가 낮은 경우(20% 미만), 전형적인 COHb 스펙트럼을 얻을 수 없다.

② COHb분석에 있어 황 이온이 있을 경우, 황화헤모글로빈(sulfhemoglobin)이

생성되어 UV/VIS 흡수에 간섭을 일으킬 수 있다. 이는 황화헤모글로빈이 환

원제인 차아황산나트륨(Na2S2O4)에 의해 RHb로 환원되지 않기 때문이다.

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(가) 헤파린 또는 EDTA 처리된 채혈관

(나) 10 mm×10 mm, 3 mL 석영 셀

(다) 인산제일칼륨 (KH2PO4)

(라) 인산제이칼륨 (K2HPO4)

(마) 차아황산나트륨 (Na2S2O4)

(3) 시약 조제

(가) 인산칼륨 완충액

KH2PO4/K2HPO4를 이용하여 0.1 mol/L, pH 6.85가 되도록 만들어 냉장 보관 한다.

(나) 용혈액 (Hemolyzing solution)

완충액을 탈 이온수로 10배 희석하고, 필요시 일주일마다 제조한다.

(다) 일산화탄소 헤모글로빈 희석액 (CO-Hb diluting solution)

20 mL 인산칼륨 완충액에 25 mg 차아황산나트륨을 넣어 만든다 (1.25

mg/mL). 단, 이 용액은 사용 직전에 만든다.

(4) 시료의 전처리

(가) 시험관에 용혈액을 3 mL 넣고 여기에 전혈을 25

μ L을 첨가하여 흔들어서

혼합한 후 5 분간 반응시킨다.

(나) 다른 시험관에 COHb 희석액 4.6 mL을 넣고, (가)의 반응에서 혼합시킨 용액

0.4 mL를 취하여 첨가한 후 가볍게 흔들어 혼합하고, 10분간 상온에 둔다.

(다) 420 nm와 432 nm에서 흡광도를 읽는다.

(대조 셀에는 COHb 희석액 만을 넣어서 측정한다)

(5) 농도 계산

(가) 검출 파장: 420, 432 nm

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혈액 중에서 COHb의 분율을 SCO로 나타내고 계산식은 다음과 같다.

1-(A×F)

R 1

SCO=

A (F -F )-F +1

R 2 1	3

AR: COHb 희석액을 넣어 측정한 표본의 A

420/A432의 비율

F1=Hb의 A432/A420의 비율=1.333

<table>
<tr><th></th><th>F 2 =CO의 A 432 /Hb의 A 420 의 비율=0.4787</th><th></th></tr>
<tr><td></td><td>(다) 검정과정 F 3 =CO의 A 420 /Hb의 A 420 의 비율=1.9939</td><td>① 6 mL 용혈액에 비흡연자로부터 채취한 혈액 0.05 mL을 첨가하여 준비한다. 이것을 2 mL씩 취해서 2개의 25 mL 용량플라스크에 각각 넣고, 이중한 플라스크에는 30 분간 일산화탄소를 통과시키면서 자주 흔들어 섞는다. ② 다른 플라스크에는 CO가 녹아들지 않도록 하기위해 고밀도 램프 같은 밝은 ③ CO 또는 공기의 평형이후, 각각의 플라스크에 COHb 희석액을 넣고 몇 번 빛을 쪼이면서 2 시간동안 공기를 통과시킨다. ④ COHb 희석액 만 넣은 것을 공시료로 해서 420 nm와 432 nm에서 흡광도 뒤집어서 섞는다. 를 측정한다.</td></tr>
<tr><td colspan="3">⑤ COHb 희석액을 첨가한 후, 즉시 CO평형 표본의 흡광도를 측정하도록 한다.</td></tr>
<tr><td colspan="3">   </td></tr>
<tr><td colspan="3">   </td></tr>
<tr><td colspan="3">(6) 생물학적 노출 평가 기준</td></tr>
<tr><td colspan="3">-4-</td></tr>
</table>

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지침 개정 이력
□ 개정일 : 2022. 12.
○ 개정자 : 산업안전보건연구원 이미영
○ 개정사유 : 일산화탄소의 생물학적 노출평가 시료 채취 시기 오류 수정
○ 주요 개정내용
- 시료 채취 시기를 작업 종료 후 15분 이내로 변경
□ 개정일 : 2023. 8. 24.
○ 개정자 : 산업안전보건연구원 이미영
○ 개정사유 : 혈액 중 카복시헤모글로빈의 생물학적 노출평가 기준값 오류
수정(5% 이하에서 3.5% 이하로 수정)
○ 주요 개정내용
- 혈액 중 카복시헤모글로빈의 생물학적 노출 평가 기준 값 : 3.5% 이하
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