# 화학물질의 생식능 및 차세대 영향시험 기술지침

> **출처**: 한국산업안전보건공단 (KOSHA)
> **지침번호**: T-21-2017
> **원본 URL**: https://portal.kosha.or.kr/openapi/v1/file/down/FL00015884272/3
> **License**: 공공누리 출처표시 (변경금지)
> **추출 방식**: PDF → kordoc (라텔웍스 자체 도구, HTML 표 보존)
> **주의**: 이미지·일부 시각적 서식 손실 가능. 정확 원본은 위 URL.

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<tr><td colspan="3">2017. 10.<br>한국산업안전보건공단</td></tr>
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안전보건기술지침의 개요
○ 작성자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 이용훈
○ 개정자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 이미주
○ 개정자 : 한국산업안전보건공단 산업안전보건연구원 이미주
○ 제정 경과
- 2015년 11월 산업독성분야 제정위원회 심의(제정)
- 2016년 11월 산업독성분야 제정위원회 심의(개정)
- 2017년 9월 산업독성분야 제정위원회 심의(개정)
○ 관련규격 및 자료
- OECD Guideline for the testing of chemicals
(TG 416, Two-Generation Reproduction Toxicity)(2001)
○ 관련법규, 규칙, 고시 등
- 산업안전보건법 제39조(유해인자의 관리 등)
- 고용노동부고시 제2015-74호(화학물질의 유해성·위험성시험 등에 관한
기준)
- 고용노동부고시 제2016-19호(화학물질의 분류․표시 및 물질안전보건자
료에 관한 기준)
○ 기술지침의 적용 및 문의
- 이 기술지침에 대한 의견 또는 문의는 한국산업안전보건공단 홈페이지
(www.kosha.or.kr)의 안전보건기술지침 소관 분야별 문의처 안내를 참고 하시기 바랍니다.
- 동 지침 내에서 인용된 관련규격 및 자료, 법규 등에 관하여 최근 개정
본이 있을 경우에는 해당 개정본의 내용을 참고하시기 바랍니다.
공표일자 : 2017년 10월 24일 제정자 : 한국산업안전보건공단 이사장

## 화학물질의 생식능 및 차세대 영향 시험 기술지침

1. 목적
이 지침은 산업안전보건법 제39조(유해인자의 관리 등), 화학물질의 유해성·

위험성시험 등에 관한 기준(고시 제2015-74호)에 따라, 화학물질 취급 및 노출

에 의한 독성 및 건강장해에 관한 정보를 제공하기 위한 화학물질의 생식능

및 차세대 영향 시험방법에 관한 지침을 정함을 목적으로 한다.

2. 적용범위
이 지침은 산업안전보건법 제39조(유해인자의 관리 등), 제40조(화학물질의 유

해성 위험성 조사) 및 고용노동부고시 제2015-74호(화학물질의 유해성ㆍ위험성

시험 등에 관한 기준)에 의거 화학물질의 노출에 의한 생식능 및 차세대 영향

에 관한 독성시험에 적용한다.

3. 용어의 정의
(1) 이 지침에서 사용되는 용어의 정의는 다음과 같다.

(가) "생식능(Reproduction ability)"이란 수컷 또는 암컷이 교미를 하여 자손

을 생산할 수 있는 능력이다.

(나) “모동물(Parental generation, P)”이란 생식독성시험에서 자손을 생산하는

수컷 또는 암컷의 부모세대를 지칭한다.

(다) “차산자(First finial generation, F1)”이란 모동물(P) 수컷과 암컷이 교미

를 해서 생산한 자손을 말한다.

(라) “차차산자(Second finial generation, F2)”이란 차산자(F1)의 수컷과 암컷

이 교미를 해서 생산한 자손을 말한다.

(마) “우수실험실 운영규정(Good Laboratory Practice, 이하 “GLP”라 한다)”란

의약품, 화장품 등의 안전성 평가를 하여 실시하는 각종 독성시험의 신

뢰성을 보증하기 위하여 연구인력, 실험시설·장비, 시험방법 등 시험의

전과정에 관련되는 모든 사항을 조직적, 체계적으로 관리하는 규정을

말한다.

(2) 그 밖의 용어의 뜻은 이 지침에서 특별한 규정이 있는 경우를 제외하고는 산

업안전보건법, 동법시행령, 동법시행규칙에서 정하는 바에 의한다.

4. 시험의 준비
4.1 시험동물

4.1.1 동물종

(1) 랫드 또는 마우스 와 같은 설치류 중 1종을 선택한다.

(2) 계통 및 품종의 선택은 동물종, 계통 또는 품종을 선택하는데 있어서는 수태

능력, 자연발생기형의 발생빈도, 기타 생식독성물질에 대한 감수성 등을 고려

한다.

4.1.2 동물 수

부검 시점에 임신된 암컷 개체의 수가 각 용량군 마다 20마리 이상이 되도록

한다. 이때 모체 사망률은 10%를 넘지 않아야 한다. 특히 임신된 암컷 개체

가 16마리 이하이면 적절하지 않으므로 암컷 동물 수는 충분하여야 한다.

4.1.3 사육조건

(1) 실험동물은 관찰을 용이하게 하기 위하여 개별적으로 사육한다.

(2) 실험동물을 사육하는 공간의 온도는 22±3℃가 되도록 한다.

(3) 상대습도는 50∼60%를 유지해야하며, 30∼70%를 넘지 않아야 한다.

(4) 개별 케이지 사용이 이상적이다. 그러나 동물의 수가 적을 경우 집단 케이

지 사용도 가능하다.

(5) 케이지는 배치로 인해 미칠 수 있는 영향을 최소화하는 방법으로 배열되어

야한다.

(6) 음용수는 자유급이로 공급하여야 하며, 일반 실험실용 사료를 공급한다.

(7) 조명주기는 12시간 간격으로 조절한다.

5. 시험방법
5.1 원리

동물의 암수에 시험물질을 수컷에게는 적어도 1 회의 정자형성기간 동안 암

컷에게는 2 회 이상의 발정주기 동안 투여하고 암수를 교미시켜 임신기간 및

수유기동안 계속 시험물질을 투여하여 시험물질의 생식능 및 후세대에 발생에

미치는 영향을 조사한다.

5.2 시험물질

5.2.1 투여방법

경구투여를

원칙으로 한다. 그러나 필요시 흡입노출, 피부노출을 할수있

다.

5.2.2 용량

용량․반응 관계를 알고, 최대 무작용량을 측정하기 위하여, 원칙적으로 3단

계 이상 용량의 시험군을 설정한다. 최고용량은 모동물(P)에서 섭이량의 저하

나 체중증가의 억제 등 약간의 독성증상을 나타내지만 10%이상의 사망까지는

가지 않는 양으로 한다. 1,000 ㎎/㎏에서 독성증상이 나타나지 않는 경우는 그

양을 최고용량으로 한다. 최저용량은 태자의 발생에 독성영향이 나타나지 않

는 양으로 한다. 대조군은 별도로 둔다. 부형제가 사용되면 대조군에도 투여를

해야한다.

5.2.3 교배와 시험투여

(1) 모동물(P) 수컷에는 5～9주령 일때부터 시험물질을 투여하는 데 교미전 10

주간(마우스는 8주간)이상 시험물질을 매일 투여한 후 교배를 시킨다. 모동

물(P) 암컷동물에는 적어도 교배전까지 2주간 계속 투여하고 다시 3주간의

교배 및 임신기간, 그리고 제1세대, 즉 차산자(F1)의 이유시까지 매일 투여

한다. 암수의 동거기간은 2～3주간 정도로 하는데 그동안 매일 교미의 유무

를 확인한다.

(2) 교미가 확인된 암컷은 분리사육하고 자연분만시켜 차산자(F1)를 얻는다. 한

어미에서 태어난 새끼들의 수를 조정할 때에는, 출생 후 비교적 빠른 시기에

새끼들의 암수 숫자를 동일하게 일정한 마리수를 무작위로 남긴다.

(3) 차산자(F1)을 이유시키는 단계에서 차세대를 얻기 위한 동물을 무작위로 선

택하고 나머지는 부검한다. 차세대를 얻기 위한 동물에는, 이유 후 모동물

(P) 수컷과 마찬가지로 시험물질을 10주간(마우스에서는 8주간) 이상 투여한

후, 원칙적으로는 각각 다른 어미에서 태어난 암수끼리 20쌍 이상을 만들어

양친동물과 마찬가지로 교배시켜 제2세대, 즉 차차산자(F2)를 얻는다. 차차

산자(F2)는 원칙적으로 이유 후 성 성숙기에 이르기까지 시험물질을 투여하

고 사육한다.

5.3 관찰 및 측정사항

5.3.1 모동물(P)

(1) 일반상태 및 사망의 유무를 관찰하고, 체중 및 사료섭취량을 측정하고, 시험

물질 섭취량을 산출한다.

(2) 모동물(P)의 수컷에 대해서는 교미율 및 수태율을 산출한다. 또 모동물(P)의

암컷에 대해서는 분만의 이상 유무를 검색하고 출산율을 산출한다.

가) 교미율 = (교미동물수/동거동물수) × 100

나) 수태율 = (임신동물수/교미동물수) × 100

다) 출산율 = (출산어미수/임신어미수) × 100

(3) 차산자(F1) 이유시에 어미는 부검하고, 내부기관을 관찰한다.

(4) 차산자(F1)의 수컷, 그리고 교미, 임신, 출산을 하지 않은 암컷은 적절한 시

기에 안락사하여 내부기관을 관찰한다. 수컷은 보통 교배기간이 끝났을 때

안락사한다. 암컷에 대해서는 교미가 되지 않은 것은 교배기간이 끝났을 때,

또 임신이나 출산이 안된 것은 교미일부터 계산해서 출산예정일을 2, 3일 경

과한 때에 안락사한다.

5.3.2 차산자(F1)

(1) 태어난 차산자(F1)에 대해서는 출생 새끼수, 생사확인, 성별, 체중 및 외관의

변화 등을 조사한다.

(2) 출생 후는 일반상태, 사망의 유무, 성장 및 형태와 기능의 발달을 관찰 한다.

적어도 주1회 체중을 측정한다. 적당한 시기마다 생존율을 산출하고 이유

시에 이유율을 산출한다.

가) 생존율 = (검사시의 생존새끼수/출산시의 새끼수, 생후 4일 또는 도태

직후의 생존 새끼수 또는 이유시의 생존새끼수)×100. 검색의 시기에 따

라 분모가 다르다.

나) 이유율 = (이유시 생존새끼수/생 후 4일 또는 도태 직후의 생존새끼수) ×100

(3) 차차산자(F2)를 얻기 위한 교배용의 차산자(F1)에 대해서는 모동물(P)와 마

찬가지의 검색을 하며, 나머지 차산자(F1)은 이유시에 부검한다.

5.3.3 차차산자(F2)

차산자(F1)과 동일한 방법으로 관찰을 하며, 원칙적으로 성 성숙기에 부검

한다. 필요에 따라 조직학적 검사 또는 혈청 생화학적 검사를 한다. 조직병리

검사를 실시하는 장기는 다음과 같다.

- - 모동물의 난소, 자궁, 경부, 질, 고환, 부고환, 정낭, 전립선, 응고선, 뇌하수
체, 시험물질 영향이 관찰된 장기

5.4 그 밖의 필요한 사항

시험 중 사망한 동물에 대해서는 가능한 한 그 사인을 조사한다. 또 일반상태가 극

히 불량하게 되어 죽음이 임박한 동물은 신속하게 희생․부검한다.

6. 시험결과 및 보고
6.1 결과의 처리

(1) 관찰된 이상상태나 독성증상과 시험물질의 투여량과의 관계에 대해서는 적

절한 통계학적 수법을 이용하여 고찰하고, 최대무영향용량에 대한 견해를 밝

힌다. 이때, 한배에서 나온 새끼들을 표본단위로 한다.

(2) 시험 결과는 우수비임상실험실(GLP)규정에 따라 작성하고 최종보고서를 첨

부한다. 또한, 가능한 항목에 대해서는 적당한 통계적 수법을 이용하여 처리

한다.

6.2 시험 결과의 보고

시험보고서는 다음의 항목을 포함한다.

(1) 시험기관의 명칭 및 소재지

(2) 시험책임자 및 담당자 성명

(3) 시험동물: 종, 계통, 체중, 주령, 및 사용수

(4) 선택용량에 대한 이론적 설명

(5) 시험물질의 화학물질명 (IUPAC 또는 CAS번호), 물리적 특성, 안정성, 균실성,

적정성, 최종농도

(6) 시험물질 투여방법

(7) 시험물질투여에 따른 독성반응자료

(8) 각 시험동물의 이상증후를 발견한 시간 및 이상증후

가) 실험기간동안 사망 일자

나) 비정상적 임상소견이 발견된 일자

(9) 사료 및 체중관련자료

(10) 각 동복 태아의 체중, 신생자의 평균체중 및 종료 시 신생자 개별 체중표

(11) 모동물(P) 체중의 성적

(12) 부검 및 조직병리학적 소견
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